Метод Максама-Гилберта химический метод секвенирования ДНК

Метод Максама-Гилберта, химический метод секвенирования ДНК * метад Максама-Гілберта, хімічны метад секвеніравання ДНК * Maxam-Gilbert technique or M.-G. sequencing or chemical s. — один из наиболее распространенных методов определения первичной последовательности нуклеотидов в молекуле ДНК. Вначале ДНК режется на фрагменты размером 0,62,0 кб, концы фрагментов метятся радиоактивной или нерадиоактивной меткой и плавятся для получения однонитчатых молекул. Радиоактивное мечение может быть изотопами серы 35S или фосфора 32P, нерадиоактивное мечение осуществляется с помощью биотиновой или флуоресцентной метки. После мечения образец ДНК разделяется на 4 аликвоты (см.), каждая из которых подвергается химической обработке, включающей 4 типа реакций. В процессе каждой из этих реакций, идущих параллельно, происходит расщепление ДНК по одному из 4 нуклеотидов. Условия реакции выбираются т. обр., чтобы не происходило полного расщепления молекулы. В результате образуются популяции 51-меченых фрагментов различной длины. Фрагменты, полученные в результате четырех типов реакций, подвергаются электрофорезу (см.) в полиакриламидном геле, и затем полосы выявляются соответствующим методом в зависимости от способа мечения. На основе результатов электрофореза определяются нуклеотиды и их последовательность в исходной ДНК.